Imunoensaios

Visão Geral

Definição

Os imunoensaios são técnicas baseadas em placas, projetadas para detetar e quantificar peptídeos, proteínas, anticorpos e hormonas. O elemento mais MAIS Androgen Insensitivity Syndrome crucial da estratégia de deteção é uma reação antigénio-anticorpo altamente específica.

Componentes

• Analito: a molécula de interesse (antigénio)
• Anticorpo: cuidadosamente selecionado para o analito específico
• Marcadores:
  • Moléculas que têm o potencial de se conjugarem com o complexo anticorpo-antigénio
  • Permitem a deteção e quantificação

Tipos de imunoensaios

O tipo de marcação define o imunoensaio que está a ser realizado:

• Enzimas: ELISA ELISA An immunoassay utilizing an antibody labeled with an enzyme marker such as horseradish peroxidase. While either the enzyme or the antibody is bound to an immunosorbent substrate, they both retain their biologic activity; the change in enzyme activity as a result of the enzyme-antibody-antigen reaction is proportional to the concentration of the antigen and can be measured spectrophotometrically or with the naked eye. Many variations of the method have been developed. St. Louis Encephalitis Virus (do inglês enzyme-linked immunosorbent assay)
• Moléculas especializadas/marcadores (juntamente com enzimas) que possuem a propriedade de emissão de luz:
  • Quimioluminescência
  • Imunoensaio de fluorescência (FIA, pela sigla em inglês)
• Isótopos radioativos: radioimunoensaio

Procedimento

Processo geral

• É adicionada a uma placa uma amostra/analito.
• São adicionados um anticorpo e um marcador.
• Forma-se um complexo anticorpo-antigénio.
• É realizada uma etapa de lavagem, em alguns ensaios, para remover antigénios/anticorpos não ligados.
• É adicionado um substrato, que reage com o rótulo e resulta em:
  • Mudança de cor ( ELISA ELISA An immunoassay utilizing an antibody labeled with an enzyme marker such as horseradish peroxidase. While either the enzyme or the antibody is bound to an immunosorbent substrate, they both retain their biologic activity; the change in enzyme activity as a result of the enzyme-antibody-antigen reaction is proportional to the concentration of the antigen and can be measured spectrophotometrically or with the naked eye. Many variations of the method have been developed. St. Louis Encephalitis Virus)
  • Luminescência (quimioluminescência)
  • Fluorescência (FIA, pela sigla em inglês)
  • Emissão de radiação (radioimunoensaio)
• São detetadas alterações/sinais para determinar a presença/quantidade de antigénio numa amostra. Os métodos de deteção podem incluir:
  • Espectrofotometria (mudança de cor)
  • Luminometria (emissão de luz)
  • Contador gama (radiação)

Variantes de ELISA ELISA An immunoassay utilizing an antibody labeled with an enzyme marker such as horseradish peroxidase. While either the enzyme or the antibody is bound to an immunosorbent substrate, they both retain their biologic activity; the change in enzyme activity as a result of the enzyme-antibody-antigen reaction is proportional to the concentration of the antigen and can be measured spectrophotometrically or with the naked eye. Many variations of the method have been developed. St. Louis Encephalitis Virus

Existem 4 tipos principais de ELISA ELISA An immunoassay utilizing an antibody labeled with an enzyme marker such as horseradish peroxidase. While either the enzyme or the antibody is bound to an immunosorbent substrate, they both retain their biologic activity; the change in enzyme activity as a result of the enzyme-antibody-antigen reaction is proportional to the concentration of the antigen and can be measured spectrophotometrically or with the naked eye. Many variations of the method have been developed. St. Louis Encephalitis Virus, que são variações do processo geral de imunoensaio:

• ELISA ELISA An immunoassay utilizing an antibody labeled with an enzyme marker such as horseradish peroxidase. While either the enzyme or the antibody is bound to an immunosorbent substrate, they both retain their biologic activity; the change in enzyme activity as a result of the enzyme-antibody-antigen reaction is proportional to the concentration of the antigen and can be measured spectrophotometrically or with the naked eye. Many variations of the method have been developed. St. Louis Encephalitis Virus direto:
  • A placa é revestida com um antigénio.
  • Incubação com um anticorpo específico marcado
• ELISA ELISA An immunoassay utilizing an antibody labeled with an enzyme marker such as horseradish peroxidase. While either the enzyme or the antibody is bound to an immunosorbent substrate, they both retain their biologic activity; the change in enzyme activity as a result of the enzyme-antibody-antigen reaction is proportional to the concentration of the antigen and can be measured spectrophotometrically or with the naked eye. Many variations of the method have been developed. St. Louis Encephalitis Virus indireto:
  • A placa é revestida com um antigénio.
  • Incubação com um anticorpo primário não marcado (específico para o antigénio)
  • Nova incubação com um anticorpo secundário marcado (específico para o anticorpo primário)
• ELISA ELISA An immunoassay utilizing an antibody labeled with an enzyme marker such as horseradish peroxidase. While either the enzyme or the antibody is bound to an immunosorbent substrate, they both retain their biologic activity; the change in enzyme activity as a result of the enzyme-antibody-antigen reaction is proportional to the concentration of the antigen and can be measured spectrophotometrically or with the naked eye. Many variations of the method have been developed. St. Louis Encephalitis Virus sanduíche (o analito é envolvido entre 2 camadas de anticorpos “sanduiche”):
  • É usada uma placa revestida com anticorpo.
  • O antigéniodo analito é adicionado à placa e incubado.
  • Nova incubado, mas agora com um anticorpo marcado
• ELISA ELISA An immunoassay utilizing an antibody labeled with an enzyme marker such as horseradish peroxidase. While either the enzyme or the antibody is bound to an immunosorbent substrate, they both retain their biologic activity; the change in enzyme activity as a result of the enzyme-antibody-antigen reaction is proportional to the concentration of the antigen and can be measured spectrophotometrically or with the naked eye. Many variations of the method have been developed. St. Louis Encephalitis Virus competitivo:
  • É usada uma placa revestida com anticorpo (é usada uma placa revestida de antigénio se se estiver a testar um anticorpo específico).
  • É adicionado o antigénio alvo da amostra (ou anticorpo).
  • É adicionado o antigénio alvo marcado (ou anticorpo) e depois lavado.
  • Nota: Ao contrário de outros métodos ELISA ELISA An immunoassay utilizing an antibody labeled with an enzyme marker such as horseradish peroxidase. While either the enzyme or the antibody is bound to an immunosorbent substrate, they both retain their biologic activity; the change in enzyme activity as a result of the enzyme-antibody-antigen reaction is proportional to the concentration of the antigen and can be measured spectrophotometrically or with the naked eye. Many variations of the method have been developed. St. Louis Encephalitis Virus, menos cor/ausência de cor indica um resultado positivo.

Usos

Os imunoensaios têm uma ampla gama de aplicações clínicas. Os exemplos listados abaixo não são exaustivos.

Doenças infeciosas

Os imunoensaios podem ser usados para identificar microrganismos diretamente (com base em antigénios ou toxinas) ou avaliar indiretamente os anticorpos para o agente infecioso. Alguns exemplos incluem:

• Deteção de microorganismos:
  • Legionella pneumophila Legionella pneumophila A species of gram-negative, aerobic bacteria that is the causative agent of legionnaires’ disease. It has been isolated from numerous environmental sites as well as from human lung tissue, respiratory secretions, and blood. Legionella/Legionellosis
  • Escherichia coli Escherichia coli The gram-negative bacterium Escherichia coli is a key component of the human gut microbiota. Most strains of E. coli are avirulent, but occasionally they escape the GI tract, infecting the urinary tract and other sites. Less common strains of E. coli are able to cause disease within the GI tract, most commonly presenting as abdominal pain and diarrhea. Escherichia coli (toxina)
  • Clostridioides difficile (toxina)
  • Hepatite B
• Deteção de anticorpos:
  • VIH
  • Vírus do Nilo Ocidental
  • Hepatite C
  • Borrelia burgdorferi Borrelia burgdorferi A specific species of bacteria, part of the borrelia burgdorferi group, whose common name is lyme disease spirochete. Borrelia
  • Treponema pallidum Treponema pallidum The causative agent of venereal and non-venereal syphilis as well as yaws. Treponema

Deteção e monitorização de neoplasias

Os imunoensaios podem ser utilizados para detetar marcadores tumorais. Alguns exemplos incluem:

• PSA PSA A glycoprotein that is a kallikrein-like serine proteinase and an esterase, produced by epithelial cells of both normal and malignant prostate tissue. It is an important marker for the diagnosis of prostate cancer. Prostate Cancer
• Antigénio-125 neoplásico
• Alfafetoproteína ( AFP AFP The first alpha-globulins to appear in mammalian sera during fetal development and the dominant serum proteins in early embryonic life. Hepatocellular Carcinoma (HCC) and Liver Metastases)
• Antigénio carcinoembrionário ( CEA CEA A glycoprotein that is secreted into the luminal surface of the epithelia in the gastrointestinal tract. It is found in the feces and pancreaticobiliary secretions and is used to monitor the response to colon cancer treatment. Serum Tumor Markers, pela sigla em inglês)

Testes Testes Gonadal Hormones de alergia

Os imunoensaios podem ser usados para detetar anticorpos IgE IgE An immunoglobulin associated with mast cells. Overexpression has been associated with allergic hypersensitivity. Immunoglobulins: Types and Functions para alergénios específicos:

• Resultado positivo:
  • Indica sensibilização a esse alergénio
  • Não indica necessariamente se esse indivíduo terá uma resposta clínica após a exposição a esse antigénio
• Resultado negativo:
  • Não sugere alergia ao antigénio
  • Não exclui completamente a alergia ao antigénio (principalmente se existir história clínica sugestiva)

Fármacos

A monitorização terapêutica de fármacos é uma aplicação importante dos imunoensaios. Os exemplos incluem a monitorização dos níveis de:

• Digoxina
• Teofilina
• Imunossupressores (e.g., ácido micofenólico, ciclosporina)
• Antibióticos (e.g., amicacina, vancomicina, gentamicina)

Outros usos diagnósticos

Exames laboratoriais adicionais onde os imunoensaios podem ser utilizados incluem:

• Troponina I de alta sensibilidade
• A função da tiroide:
  • Hormona estimulante da tiroide (TSH, pela sigla em inglês)
  • Tiroxina livre ( T4 T4 The major hormone derived from the thyroid gland. Thyroxine is synthesized via the iodination of tyrosines (monoiodotyrosine) and the coupling of iodotyrosines (diiodotyrosine) in the thyroglobulin. Thyroxine is released from thyroglobulin by proteolysis and secreted into the blood. Thyroxine is peripherally deiodinated to form triiodothyronine which exerts a broad spectrum of stimulatory effects on cell metabolism. Thyroid Hormones) e triiodotironina ( T3 T3 A T3 thyroid hormone normally synthesized and secreted by the thyroid gland in much smaller quantities than thyroxine (T4). Most T3 is derived from peripheral monodeiodination of T4 at the 5′ position of the outer ring of the iodothyronine nucleus. The hormone finally delivered and used by the tissues is mainly t3. Thyroid Hormones)
• Nutricional:
  • Folato
  • Vitamina b12
  • Ferritina
  • Vitamina D

Vantagens e Erros

Vantagens

As vantagens dependem do tipo de imunoensaio utilizado; no entanto, geralmente, são:

• Baratos
• Sensíveis
• Específicos
• Relativamente rápidos e convenientes

Fontes de erro

• Reatividade cruzada (os anticorpos reagentes ligam-se a moléculas que são semelhantes ao analito → resultados falsos positivos/falsamente elevados)
• Autoanticorpos (anticorpos endógenos, em vez de anticorpos reagentes) ligam-se ao analito → resultados falsos negativos/falsamente baixos)
• Anticorpos antirreagentes (anticorpos endógenos ligam-se aos anticorpos reagentes → resultados falsos positivos/falsamente elevados)