Pruebas Cromosómicas

Las pruebas cromosómicas se pueden lograr usando varias técnicas, las cuales pueden identificar anomalías cromosómicas. El cariotipo (una técnica que involucra la tinción, organización y visualización de los cromosomas), que se utiliza para identificar aneuploidias y cambios estructurales importantes. El cariotipo no es sensible para identificar anomalías pequeñas y es un proceso laborioso. El análisis de microarray cromosómico es una técnica comparativa que utiliza fluorescencia para identificar y cuantificar secuencias genéticas específicas y es mucho más sensible para identificar variantes en el número de copias, como microdeleciones o microduplicaciones. Sin embargo, el análisis de microarray cromosómico no es útil para identificar ciertas variaciones, como las translocaciones equilibradas. La hibridación fluorescente in situ utiliza sondas fluorescentes para identificar y localizar genes específicos en los cromosomas. En comparación con el cariotipo, la hibridación fluorescente in situ es mucho más sensible y específica para determinar varias anomalías (excepto las mutaciones puntuales), pero está limitada por las sondas genéticas disponibles en la actualidad.

Última actualización: Sep 1, 2022

Responsabilidad editorial: Stanley Oiseth, Lindsay Jones, Evelin Maza

Descripción General

Revisión de la terminología utilizada en genética médica

Aberraciones cromosómicas numéricas:

  • Aneuploidía: número incorrecto de cromosomas individuales
  • Poliploidría: múltiples conjuntos de cromosomas
  • Mosaicismo: la presencia de ≥ 2 poblaciones de células dentro de un organismo, cada una con genomas diferentes

Aberraciones cromosómicas estructurales:

  • Deleciones: la pérdida de una sección específica del cromosoma
  • Duplicaciones: multiplicación de secciones de cromosomas individuales
  • Inversiones: rotación de 180° de una sección cromosómica y posterior reintegración en el cromosoma original
  • Translocaciones:
    • Intercambio de fragmentos entre cromosomas no homólogos
    • Puede ser equilibrado (igual) o desequilibrado (desigual)

Pruebas citogenéticas

  • Análisis de una muestra para cambios/anomalías cromosómicas
  • Más comúnmente utilizado para:
    • Tamizaje prenatal y diagnóstico de alteraciones cromosómicas
    • Identificación de anomalías cromosómicas relacionadas con malignidad
  • Incluyen:
    • Cariotipo
    • Análisis de microarray cromosómico
    • Hibridación fluorescente in situ

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Cariotipo

Definición

El cariotipo, también conocido como análisis cromosómico, es un método común para producir una imagen de los cromosomas de un individuo para detectar:

  • Grandes cambios estructurales en los cromosomas
  • Aneuploidía
  • Poliploidía

Procedimiento

  • El cariotipo se puede realizar utilizando varios tipos de muestras, incluyendo:
    • Sangre
    • Médula ósea
    • Líquido amniótico
    • Tejido placentario
  • Método:
    • Las células de una muestra se cultivan y estimulan para que se dividan.
    • Se agrega colchicina a las células cultivadas → detiene el ciclo celular en la metafase → los cromosomas se contraen al máximo (es más fácil reconocer los patrones de bandas)
    • Los cromosomas son entonces:
      • Teñidos (permite la visualización de patrones de bandas e identificación de cromosomas)
      • Ordenados
      • Numerados (23 pares)
    • Los cromosomas se analizan según:
      • Morfología
      • Tamaño
      • Relación de longitud de brazo
      • Patrones de bandas
Mitosis

Resumen de los estadios de la mitosis: profase, prometafase, metafase, anafase y telofase: durante la determinación del cariotipo, el ciclo celular se detiene en la metafase, generalmente mediante la adición de un agente como la colchicina (que inhibe la polimerización de los microtúbulos para detener la mitosis).

Imagen por Lecturio.

Usos

El cariotipo es útil para identificar y diagnosticar:

  • Trisomías y monosomías (e.g., síndrome de Down/trisomía 21)
  • Trastornos de los cromosomas sexuales (e.g., síndrome de Klinefelter/47, XXY)
  • Anomalías estructurales en los cromosomas (e.g., cromosoma Filadelfia/translocación recíproca (9;22)(q34;q11))

Ventajas

  • El genoma completo se puede visualizar a la vez.
  • Buena sensibilidad y especificidad para afecciones específicas
  • Se puede utilizar una amplia gama de tipos de muestras.

Desventajas

  • Solo puede detectar anomalías importantes y no pequeños cambios
  • La interpretación depende del operador.
  • Proceso laborioso

Análisis de Microarray Cromosómico

Definición

El análisis de microarray cromosómico es una técnica de alta resolución que utiliza etiquetas fluorescentes para identificar pequeños desequilibrios cromosómicos.

Procedimiento

  • Puede cubrir todo el genoma o puede tener objetivos específicos (e.g., para enfermedades conocidas)
  • Una rejilla de vidrio o silicona es cubierta con miles de secuencias específicas de ácidos nucleicos (sondas).
  • El ADN de muestra y de control (o comparativo) son:
    • Cortados en fragmentos
    • Marcados con diferentes etiquetas fluorescentes
    • Agregados al portaobjetos
  • Las sondas y la muestra pueden hibridarse mediante unión complementaria con las sondas
  • Un escáner detecta la expresión génica relativa en función del color y la intensidad de la fluorescencia (↑ expresión → ↑ intensidad).

Usos

  • El análisis de microarray cromosómico proporciona pruebas genéticas integrales para anomalías no detectadas durante el cariotipo:
    • Copiar variantes numéricas:
      • Microdeleciones (e.g., síndrome de DiGeorge/microdeleción de 22q11.2)
      • Microduplicaciones
      • Translocaciones desequilibradas
    • Polimorfismos de un solo nucleótido
  • También puede detectar aneuploidía
  • Usado para:
    • Tamizaje prenatal
    • Diagnóstico de afecciones genéticas
    • Análisis forense
    • Estudiar enfermedades y terapias

Ventajas

  • Puede perfilar la expresión de miles de genes simultáneamente
  • Puede detectar anomalías cromosómicas muy pequeñas

Desventajas

  • No se pueden detectar translocaciones, inversiones e inserciones equilibradas.
  • El mosaicismo puede afectar la detección.
  • Costoso

Hibridación Fluorescente In Situ

Definición

Técnica en la que se utiliza una sonda fluorescente de ADN (o ARN) para identificar y localizar genes específicos en los cromosomas

Procedimiento

  • Se utiliza una sonda de ADN monocatenario con un tinte fluorescente para unirse a un sitio de gen específico.
  • Las sondas se hibridan con cromosomas de muestra en un portaobjetos.
  • La microscopía de fluorescencia se utiliza para detectar señales.
Cromosomasalupeces

Cariotipo humano femenino sometido a hibridación fluorescente in situ con una sonda a la secuencia Alu (verde) y contrateñido para ADN (rojo)

Imagen: “ChromosomesAluFish” por Dietzel65. Licencia: CC BY 2.5

Usos

  • La hibridación fluorescente in situ puede ayudar a visualizar directamente varias anomalías cromosómicas, que incluyen:
    • Aneuploidía
    • Inserciones
    • Translocaciones
    • Microdeleciones (e.g., síndrome de cri du chat/microdeleciones en el brazo corto del cromosoma 5)
    • Microduplicaciones
  • Para detectar genes asociados con malignidad (e.g., HER2 en cáncer de mama)

Ventajas

  • Sensibilidad y especificidad mejoradas en comparación con el cariotipo clásico
  • Se puede utilizar tanto para células en división como para células que no se dividen
  • Se pueden utilizar múltiples sondas.

Desventajas

  • No se pueden detectar mutaciones puntuales o anomalías muy pequeñas
  • No todas las regiones cromosómicas tienen una sonda disponible (en este momento).
  • Se debe elegir la sonda correcta para el diagnóstico.

Referencias

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