Transforming Eukaryotic Cells

00:00 Wie ich bereits erwähnte, kann der Prozess bei eukaryotischen Zellen ein wenig schwieriger sein, weil sich diese nicht wirklich transformieren wollen.

00:09 Daher müssen verschiedene Methoden angewendet werden. Zunächst einmal wurde die Schrotschuss-Methode ausprobiert, die tatsächlich an eine Schrotflinte erinnert. Sie nehmen eine Pistole, feuern DNA auf die Zellen und hoffen, dass die Zellen diese aufnehmen. Das erfolgt nicht sehr spezifisch.

00:29 Die DNA ist an Gold- oder Wolframpartikeln gebunden, diemit hoher Geschwindigkeit in die Zellen geschossen werden.

00:35 Es wird einfach gehofft, dass die Zellen die DNA aufnehmen. Das hat sich zwar als ziemlich erfolgreich, aber nicht als sehr präzise erwiesen. Es gibt mittlerweile präzisere Mechanismen, die wirklich cool sind. Eine davon werde ich Ihnen später vorstellen.

00:53 Wir haben ein Plasmid in einer Bakterienzelle. Dieses spezielle Plasmid ist ein Ti-Plasmid oder ein Tumor-induzierendes Plasmid. Diese Tumor-induzierenden Plasmide können wir zur Übertragung von Informationen verwenden und sehen dann, dass die Informationen oder das DNA-Fragment übertragen wurden.

01:15 Tumor-induzierende Plasmide sind in Bakterienzellen enthalten, die häufig Pflanzenarten infizieren. Wenn eine Bakterienzelle die Pflanze infiziert, wird das Plasmid auf die Pflanze übertragen, induziert einen Tumor und der Tumor wächst auf der Pflanze.

01:29 Wir können diese Tumor-induzierenden Plasmide nehmen und unsere Restriktionsendonukleasen verwenden, um spezifische Gene zu extrahieren und diese dann in das Plasmid einzubauen.

01:43 Wenn das Plasmid in die Pflanzenzellen eingeführt wird, kann es in den Zellkern der Pflanze gelangen. Das ist das eigentliche Ziel. Das Bakterium versucht, die Pflanze zu infizieren und DNA einzuschleusen, sodass zelluläre Prozesse durcheinander gebracht werden und ein Tumor entsteht.

02:01 Die Pflanzenzellen vermehren sich, wodurch der Tumor wächst. So erhalten wir eine Pflanze mit einem Tumor. Daraus können wir ableiten, dass die DNA, die wir in das bakterielle Plasmid eingefügt haben, in die Pflanze gelangt ist, da diese daraufhin einen Tumor entwickelt oder eben nicht.

02:24 Das hängt davon ab, wo das Gen in das Plasmid eingefügt wird und wie das Plasmid in die Pflanze gelangt. Wir können über diesen Mechanismus genetische Veränderungen in Pflanzen induzieren.